ВведениеВ настоящее время все более широкое распространение в форелеводстве получает современная технология выращивания рыб с применением оборотного водоснабжения, называемого установкой замкнутого водоснабжения (УЗВ). В условиях УЗВ температурный режим в течение всего года сохраняется на уровне, благоприятном для роста рыб и развития репродуктивной системы. В этом случае целесообразно содержать несколько маточных стад, созревающих в разное время года, с тем, чтобы более полно использовать рыбоводное оборудование, а также для получения посадочного материала в течение более длительного периода.Для реализации этой задачи можно собрать коллекцию из пород с разными сроками созревания, у которых этот признак закреплен генетически. Такая коллекция пород форели была создана на Адлерском племзаводе в конце прошлого столетия, где использовали для разведения четыре породы, созревающие поочередно: форель камлоопс (октябрь-ноябрь), форель Адлер (ноябрь-декабрь), форель Дональдсона (декабрь-январь), стальноголовый лосось (февраль-март) [1].Еще одним способом является смещение сроков нереста, которое достигается отбором производителей, созревающих в нужные сроки, и закреплением этого признака в ряду поколений. Предпосылкой для успешной селекции самок и самцов по срокам нереста являются высокий уровень изменчивости и повторяемости этого признака [2; 3; 4; 5]. В отечественном форелеводстве работы в этом направлении были проведены на племенном форелеводческом заводе Адлер. В качестве ресурсов для селекции использовали производителей пород из уже созданной коллекции. Была проведена селекция по созданию отводки у форели камлоопс с более ранним созреванием рыб в августе-сентябре, в результате была создана новая порода — форель Августин, а также смещению нереста стальноголового лосося на более поздние сроки. Таким образом, был создан комплекс маточных стад с чередующимся созреванием в период с августа по март, а при использовании бицикличных самок получали дополнительно икру в мае-июле [1].В Ропше УЗВ начали эксплуатировать с 2008 года. Для разведения использовали форель породы Рофор. Нерест самок происходит в осеннее-зимний период. Летом 2021 г. были обнаружены самки, созревшие через полгода после первого созревания. Тогда же были начаты работы по исследованию бицикличного созревания [6]. Потомство самок, созревших в конце июля 2021 г., было оставлено на выращивание, для создания исходного стада с последующей селекцией в ряду поколений по признаку бицикличного нереста, с целью его закрепления. Эффективность такой селекции была продемонстрирована японскими учеными, которые за 10 лет создали линию форели, в которой 60-70% самок созревали два раза в году [7].Двухгодовалые самки основного ремонтного стада, наряду с моноцикличными рыбами, включают бицикличных самок. В период первого созревания в осенне-зимний период мы не можем дифференцировать их по кратности последующего созревания. Но при отборе двухгодовалых самок в разные сроки их созревания, с целью последующего смещения нерестового сезона, важно не снизить долю двукратников в стаде. Для этого мы исследовали зависимость частоты встречаемости бицикличных самок от сроков созревания рыб в двухгодовалом возрасте.Цель нашей работы состояла в оценке двухгодовалых самок маточного стада форели, выращиваемых в условиях УЗВ, для обоснования и разработки методов отбора, при использовании этих рыб в качестве ресурса, при селекции по срокам и кратности созревания. Исследовали двухгодовалых самок, созревших в разные сроки нерестового сезона по масса-размерным и репродуктивным показателям, по выживаемости потомства в период эмбриогенеза, а также по частоте встречаемости бицикличных самок. Материал и методы Работу проводили осенью 2022 и летом 2023 годов.В Ропше УЗВ представляет систему специализированных рыбоводных участков с регулируемой температурой воды, освещенности, проточности и автоматического кормления. Система состоит из инкубатора, закрытого цеха с искусственным освещением и открытой площадкой с естественным фотопериодом.Объект изучения – впервые созревшие самки радужной форели породы Рофор в возрасте 2 и 2,5 года.При выращивании рыб использовали метод комбинированного содержания на разных участках в разные периоды их развития.Икру инкубировали при стабильной температуре воды 10ºС. После вылупления личинок и до достижения молоди средней массы тела 0,1 г их содержали в лотках при температуре 14ºС. Дальнейшее выращивание проводили в закрытом цехе и на уличном модуле. Температура менялась в пределах от 8 до 15ºС.Самок проверяли на созревание один раз в 7 дней.Для сравнительной оценки самок по массе тела, рабочей и относительной плодовитости и средней массе икринок, при созревании рыб в начале, середине и окончании нерестового сезона, использовали по 50 особей случайной выборки.Для индивидуальной оценки производителей по выживаемости эмбрионов, использовали 19-23 особей случайной выборки. После ручного отцеживания от каждой самки брали порцию икры (350-400 шт.), осеменяли свежеприготовленной смесью спермы 2-3 самцов и инкубировали отдельно. В качестве среды для осеменения применяли буферный солевой раствор D532 [7]. В его состав входят: 24,2 г Трис + 22,5 г глицин + 1,1 г CaCl2, + 73,1 г NaCl на 10 дистиллированной Н2О (рН=9,0). Результаты исследований Динамика созревания Почти у всех самок (около 95%) первое созревание наблюдали в возрасте два года.Исследованные рыбы были потомками трехгодовалых самок, созревших в период массового созревания 10 и 17 декабря 2020 года. Нерестовый сезон у двухгодовиков начался в конце ноября и закончился во второй декаде декабря. Массовое созревание рыб наблюдали в период с 15 по 21 декабря, что совпадало по срокам нереста с родительскими особями. Динамика нереста представлена в таблице 1. Благодаря индивидуальному мечению двухгодовалых самок, удалось провести их разделение по кратности нереста после летнего созревания рыб. Таким образом, мы получили данные по частоте встречаемости бицикличных самок, в зависимости от сроков созревания рыб в двухгодовалом возрасте (см. табл. 1). Таблица 1. Динамика созревания самок и частота встречаемости бицикличных рыбFigure 1. Dynamics of maturation of females and frequency of occurrence of bicyclic fishДата созреванияКоличество созревших рыб, %Количество бицикличных рыб, %24 ноября3602 декабря71609 декабря174515 декабря241521 декабря221229 декабря14512 января10019 января31 Бицикличные самки в подавляющем большинстве находились среди рыб, которые созрели в первой половине нерестового сезона, т.е со 2 по 15 декабря (76%). Наибольшее количество этих рыб (45%) были обнаружены среди самок, созревших за неделю до массового созревания.Характеристика самок, созревших в разные сроки нерестового сезонаЕсли принять за начало развития рыб середину декабря 2020 г. (дата получения икры и спермы у родительских особей), созревание рыб в конце ноября-начале декабря происходило в возрасте около 23,5 месяцев, массовое созревание наблюдали у рыб в возрасте 24 месяцев, а в конце нереста возраст самок составлял 25 месяцев. Характеристика самок представлена в таблице 2. Таблица 2. Масса тела и репродуктивные показатели самок, созревших в разные сроки нерестового сезона (n=50)Figure 2. Body weight and reproductive indicators of females matured at different times of the spawning season (n=50)ПризнакиСроки созревания24 ноября-02 декабря15-21 декабря12-19 январяХ ± mxCV, %Х ± mxCV, %Х ± mxCV, %Масса тела, г1242±31,417,81181±28,617,11300±33,118,0Средняя масса икринок, мг47±1,014,551±1,013,453±0,911,4Рабочая плодовитость, шт.2653±108,528,92630±100,226,92909±84,120,4Индекс репродуктивности, г/кг110±3,522,6128±4,826,5136±3,4216,6Примечание: M±m – среднее значение и его ошибка, CV– коэффициент вариации Самки, созревшие в конце сезона, превосходили рыб, созревших в начале и середине, по массе тела и рабочей плодовитости: р=0,01 и р=0,05, соответственно. Достоверные различия, обусловленные разными сроками созревания, были также выявлены между показателями средней массы икринок. У самок, созревших в начале сезона, показатель массы икринок был достоверно ниже, чем в середине нереста (р=0,01) и еще ниже – в конце нереста (р=0,001).В пределах выборок, у самок, созревших в начале и в конце нереста плодовитость возрастала с увеличением массы тела (r=0,49-0,50; р=0,01), а в середине нереста более крупные самки продуцировали более крупную икру (r=0,37-0,41; р=0,01). Во всех трех выборках средняя масса икринок была отрицательно взаимосвязана с плодовитостью (r=0,31-0,51; р=0,05-0,01). Оценка самок по выживаемости эмбрионов В таблице 3 представлены результаты индивидуальной оценки самок по средней массе икринок, коэффициенту вариации массы икринок и выживаемости эмбрионов на стадии пигментации глаз. Таблица 3. Характеристика икры у самок, созревших в разные сроки нерестового сезонаFigure 3. Characteristics of eggs in females matured at different times of the spawning seasonПризнакиСроки созревания02 декабряn=2015 декабряn=1929 декабря-19 январяn=23Средняя масса икринок, мг48±1,633-6253±1,345-6750±1,240-61Изменчивость икринок по массе,CV,%6,0±0,602,8-15,15,3±0,342,6-7,76,5±0,752,8-18,7Выживаемость эмбрионов, %64±6,62-9976±4,729-9578±4,123-95Примечание: над чертой – среднее значение и его ошибка; под чертой – пределы варьирования признака Выживаемость эмбрионов была самой низкой у самок, созревших в начале сезона, но различия по этому признаку ни в одном случае не достигали достоверного уровня. Не было выявлено зависимости жизнеспособности зародышей от массы икринок, несмотря на высокое разнообразие этих показателей у самок внутри выборок. Выживаемость эмбрионов отрицательно коррелировала с уровнем изменчивости икры у рыб, созревших в конце сезона: r=0,46 (р=0,05). Обсуждение У самок, выращенных в условиях УЗВ, подавляющее количество рыб созрели в двухгодовалом возрасте, что считается обычным для генетически улучшенных стад, при разведении их в благоприятных температурных условиях и нормативном режиме кормления [9].По массе тела и репродуктивным признакам лучшими показателями отличались самки, созревшие в конце нерестового сезона. У рыб, созревших в самом начале нереста, был самый низкий индекс репродуктивности, поскольку самки в это время продуцировали самую мелкую икру. Чем позже созревали самки, тем крупнее у них была икра. Аналогичные изменения в размерах яйцеклеток, связанные с изменениями периода гаметогенеза и сроков созревания, были отмечены ранее у радужной форели [7; 10; 11].Выживаемость эмбрионов была сравнительно низкой у рыб в начале нереста, но в дальнейшем этот показатель приблизился к нормативному уровню 80%, принятому для племенной форели [12]. Ранее, при проведении селекции в форелеводстве, не рекомендовалось использовать впервые созревших производителей, поскольку значительная часть этих самок, как правило, продуцировала мелкую икру с низкой выживаемостью. Однако было отмечено, что среди двухгодовалых рыб имелось некоторое количество самок, икра которых могла быть использована в рыбоводных целях [13].Независимость показателей выживаемости эмбрионов от величины яйцеклеток, полученная в нашей работе, согласуется с результатами исследований, полученных у разных видов лососевых рыб [11; 14; 15; 16; 17]. Таким образом, как мелкая, так и крупная икра может характеризоваться высоким качеством, однако следует учитывать, что с размером икры у лососевых рыб была выявлена взаимосвязь величины икры и роста зародышей и личинок [18; 19; 20]. Поэтому не целесообразно использовать для воспроизводства самок с мелкой икрой, а также – с высокими показателями изменчивости икры массы икринок, поскольку, согласно полученным нами данным, этот показатель может отрицательно коррелировать с выживаемостью эмбрионов.Наибольшая частота встречаемости рыб с двукратным нерестом была отмечена в группе самок, созревших за неделю до наступления массового созревания. Самой низкой она была у рыб, созревших во второй половине нерестового сезона.Полученные нами данные следует учитывать при выборе интервалов отбора двухгодовалых рыб, как при формировании маточного стада, так и при селекции по срокам созревания, в целях создания новых пород и отводок.Отбор производителей, в целях смещения сроков созревания в нерестовом сезоне, предусматривает выполнение двух условий: во-первых, оценку и отбор производителей следует проводить в сжатые сроки, т.е. разница между закладками первой и последней партий икры для воспроизводства не должна превышать 5-7 дней. Это позволит избежать разнокачественности племенного потомства по массе и размерам, вызванной стартовыми различиями в начале перехода личинок на активное питание. Во-вторых, группа рыб, созревших в нужный срок, должна быть достаточно многочисленной для проведения дальнейших селекционных мероприятий, связанных с оценкой, отбором и формированием семей для воспроизводства. В нашем случае этим требованиям отвечают две группы самок, в одной из которых рыбы созрели за неделю до наступления массового нереста, а во второй – через неделю после него. В случае использования для скрещиваний самок с более ранним или более поздним нерестом, численность которых невелика, основным критерием отбора на первых этапах работ будет срок созревания, а при получении достаточно многочисленной группы рыб с созреванием в нужные сроки, можно проводить сопряженный отбор по остальным хозяйственно-полезным признакам.Учитывая высокий темп роста рыб в условиях УЗВ, раннее созревание самок и хорошее качество икры, селекция двухгодовалых рыб по срокам созревания может быть эффективной. Тем более, что для этого признака был отмечен высокий уровень повторяемости [2; 3]. Отбор рыб в этом возрасте ускорит темп селекции и позволит достичь нужного результата раньше, чем в случае использования трехгодовиков. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.Вклад авторов в работу: Зинченко А.А. – сбор и анализ данных, окончательная проверка. Шиндавина Н.И. – идея работы, сбор и анализ данных. Ежков В.С. – сбор данных.  The authors declare that there is no conflict of interest.The authors' contribution to the work: Zinchenko A.A. – data collection and analysis, final verification. Shindavina N.I. – the idea of work, data collection and analysis. Yezhkov V.S. – data collection.