Russian Federation
UDK 639.51 Разведение ракообразных
Nauplii of the brine shrimp Artemia sp. are the optimal starter food for many fish and crustaceans species. For this reason, technologies for their production are being improved, including the activation of cysts. The effect of different concentrations of hydrogen peroxide on hatching process a as activator was studied. Its optimal concentration has been determined; it amounts to 0.2-0.4 ml/l. The reasons for various impacts of hydrogen peroxide on different Artemia cysts are formulated. The dynamic of brine shrimp hatching with and without the activator was studied. It has been established that the addition of a hydrogen peroxide solution as an activator increases the hatching of Artemia nauplii, however, it does not impress on the rapidity of Artemia nauplii release from cysts.
artemia, activation, device peroxide, optimal power, hatch dynamics
Введение
Жаброногий рачок артемия Artemia spp. широко используется в качестве живого кормового объекта для личинок рыб и ракообразных [18, 21; 22, 26, 28]. Суточные науплии, получаемые из его цист, обладают большой пищевой ценностью, высоким содержанием белков (до 70%), жиров (до 30%), полиненасыщенных жирных кислот, незаменимых аминокислот, а также отличаются легкостью получения, чем объясняется огромная популярность этого вида корма [7, 11, 19, 23]. На сегодняшний день существует значительное число работ, посвященных изучению инкубации цист с целью получения науплиев артемии. И, несмотря на то, что процесс инкубации цист изучают уже много лет, до сих пор появляются исследования технологии инкубации цист [5, 25, 28, 30, 33, 34], в которых, например, уточняются и дополняются методики увеличения выклева науплиев.
Одним из наиболее известных методов повышения эффективности выклева является активация цист артемии при помощи различных химических соединений, таких как гипохлорид натрия или аскорбиновая кислота [13, 16, 18, 20]. Однако наиболее применяемым активатором является раствор пероксида водорода. При этом используют два способа активации цист: замачивание в растворе пероксида на 15-20 мин. с последующей промывкой, а также добавление активатора непосредственно в инкубационный раствор [2, 3, 7, 9, 16, 25], причем последний используется наиболее часто. При этом, приведенные в литературных источниках, количество активатора (0,1-2,0 мл/л), как и концентрация, добавляемого в инкубационный раствор, пероксида водорода (3-33%) сильно разнятся. В результате чего, количество чистого вещества, вносимого в раствор, отличается в разных работах в несколько раз.
Целью данной работы являлось определение оптимального количества активатора, а также изучение динамики выхода науплиев артемии из цисты при добавлении активатора и без него.
Методика
Для достижения поставленной цели проведено два эксперимента. В первом определяли оптимальное количество активатора для двух партий цист. Во втором – изучена динамика выхода науплиев артемии из цисты при добавлении активатора и без него.
Работы проведены в аквариальной Отдела аквакультуры беспозвоночных ФГБНУ «ВНИРО». В экспериментах инкубация цист проводилась по единой методике. В конусные емкости с объемом воды 1,5 л, снабженные постоянной аэрацией, помещали цисты артемии из расчета 1 г/л. Для приготовления инкубационного раствора использовали морскую соль Red Sea (USA), соленость раствора составляла 25‰. Емкости были установлены в термостатирующий контейнер, поддерживающий температуру воды 27,0-27,5ºС. За время проведения работ, при помощи мультипараметрового портативного зонда Multi 03630, определяли основные показатели (температура, соленость, pH).
Инкубационные емкости освещались четырьмя 140-ваттными люминесцентными лампами. Освещенность на водной поверхности составляла 2000-2600 люкс. В качестве активатора использовали 3%-ный раствор пероксида водорода.
При оценке эффективности выклева артемии использовали два показателя: выклев науплиев (Н), выражающий процентное количество свободно плавающих науплиев, полученных при инкубации, и полный выклев (Н+), учитывающий, наряду со свободно плавающими науплиями, артемию на стадиях «парашют» и «эмбрион». Более важным показателем является выклев науплиев (Н), поскольку цель инкубации цист в конечном итоге состоит в получении свободно плавающих науплиев и их дальнейшем использовании в качестве живого корма.
Определение оптимального количества активатора для инкубации цист артемии
Материалом для данного исследования послужили цисты двух партий: компаний «Арсал» (вариант А) и «Русские Биоресурсы» (вариант Б). Для каждой партии цист протестировано несколько вариантов концентрации активатора: 0, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 и 1,0 мл/л. Эксперимент выполнен в трех повторностях. Продолжительность инкубации составляла 24 ч, после чего из каждой емкости, при непрерывной аэрации, отбирали по 5 проб объемом 1,0 мл и фиксировали 4%-м раствором формальдегида. В каждом взятом образце определяли долю свободно плавающих науплиев (Н), а также полное вылупление (Н+).
Динамика инкубации цист артемии
Материалом для исследования послужили цисты артемии компании «Арсал». Эксперимент поставлен в двух вариантах: с добавлением активатора (0,2 мл/л) и без него. Продолжительность инкубации составила 36 часов. Каждые 3 часа из каждой емкости отбирали по 5 образцов объемом по 1 мл, что позволило отследить процесс инкубации цист на протяжении всего периода. Образцы фиксировали, определяли количество цист на следующих этапах инкубации: целые цисты, цисты с трещиной, выход науплиуса из хориона, «парашют», «эмбрион», свободно плавающий науплиус (рис. 1). Эксперимент проведен в трех повторностях.
Рисунок 1. Стадии выклева науплиев артемии: 1 – целые цисты, 2 – цисты с трещиной, 3-6 –выход науплиуса из хориона, 7 – «парашют», 8 – «эмбрион», 9 – свободно плавающий науплиус
Figure 1. Stages of hatching of artemia nauplii: 1 – whole cysts, 2 – cysts with a crack, 3-6 – exit of nauplius from cyst, 7 – "parachute", 8 – "embryo", 9 – free-floating nauplius
Результаты
Влияние концентрации активатора на инкубацию цист артемии
На рисунке 2А показан выклев науплиев артемии. Количество полученных науплиев в контрольной группе составило 64,9% для цист варианта А и 20,3% для цист варианта Б. Внесение активатора в инкубационный раствор привело к росту выклева. Наибольший выклев для обеих партий получен при добавлении активатора в концентрациях 0,2 и 0,4 мл/л. Он составил для варианта А – 86,0% и 85,1%, соответственно, 42,0% и 46,7% – для варианта Б. Также в варианте Б, при концентрации 0,6 мл/л, выклев составил 42,6%. При этом для двух партий цист статистически достоверных отличий между этими вариантами концентрации активатора не выявлено (рис. 3).
Схожие результаты получены для полного выклева (рис. 2Б). Наилучшие результаты также получены при самых низких концентрациях активатора – 0,2 и 0,4 мл/л. Полный выклев для варианта А составил 88,0%, при концентрации активатора 0,2 мл/л, и 87,8%, при концентрации 0,4 мл/л. Однако повышение концентрации пероксида водорода в растворе здесь дает другую картину. В этом случае также видна тенденция к уменьшению выклева, но различия между разными концентрациями активатора незначительны. Причина в том, что, при повышении содержания активатора в растворе, доля свободно плавающих науплиев уменьшается, а промежуточных инкубационных стадий возрастает.
Рисунок 2. Выклев артемии при различной концентрации активатора: выклев науплиев (А), полный выклев (Б)
Figure 2. Artemia hatching at different concentrations of activator: nauplii hatching (A), total hatching (Б)
В варианте Б наибольший полный выклев отмечен при концентрации активатора 0,6 мл/л (55,1%). При других концентрациях активатора величина полного выклева существенно не отличалась от максимальной (46,6% при концентрации активатора 0,2 мл/л и 52,2% при концентрации 0,4 мл/л). Из полученных результатов можно сделать вывод о том, что, при использовании 3%-го раствора пероксида водорода в качестве активатора, оптимальной его концентрацией для взятых партий является 0,2-0,4 мл/л.
Добавление активатора существенно увеличило количество науплиев при инкубации цист обеих партий, однако степень его воздействия на них несколько отличалась. Так, концентрация пероксида водорода 0,2 и 0,4 мл/л увеличила выклев цист варианта А на 32%, по сравнению с контролем, тогда как выклев цист варианта Б, при добавлении активатора, вырос относительно контроля на 100%. Дальнейшее увеличение концентрации пероксида водорода вызвало значительное снижение выклева науплиев при инкубации цист варианта А (с 85% до 55% и ниже), однако для цист варианта Б снижение выклева было несущественным (с 46% до 40-42%).
Динамика выклева науплиев артемии
Начало выклева науплиев отмечено через 6 часов инкубации появлением первых цист с треснувшим хорионом (рис. 3). Их доля составляла 0,24%. Через 9 часов инкубации доля цист с треснувшим хорионом увеличилась почти в 7 раз (1,61%), в единичных случаях на поверхности хориона начали появляться науплии. Количество артемии на стадии выхода науплиуса из хориона всех этапах проведения эксперимента было минимальным, что говорит о том, что выход рачка проходит очень быстро.
Рисунок 3. Динамика выклева науплиев артемии без добавления активатора
Figure 3. Dynamics of hatching of artemia nauplii without the addition of an activator
Массовый выход науплиев начался через 12 часов после начала инкубации: в инкубационном растворе присутствовали свободные от хориона эмбрионы (6,0%), а также – большое количество цист на стадии «парашюта» (50,7%). Кроме того, в растворе появились первые свободно плавающие науплии, однако на этом этапе они представлены лишь единичными экземплярами (0,03%).
Через 18 час. с момента начала инкубации количество свободно плавающих науплиев в инкубационном растворе значительно увеличилось (58,6%). В дальнейшем количество свободно плавающих науплиев также увеличивалось, но незначительно. В свою очередь, количество рачков промежуточных стадий выклева уменьшалось, что говорит о том, что процесс выхода науплиев из хориона продолжался.
Переход от одной стадии выклева к другой, при добавлении активатора, происходил в те же сроки после начала инкубации, что и без него (рис. 4).
Рисунок 4. Динамика выклева науплиев артемии при добавлении активатора
Figure 4. Dynamics of hatching of artemia nauplii with the addition of an activator
Однако его добавление увеличило долю особей на каждой из стадий выклева. В результате чего выклев науплиев (Н) через 36 часа достиг максимума и составил 92,9%, тогда как без активатора – всего 73,6%.
Обсуждение
Среди литературных данных нет единого мнения об оптимальной концентрации раствора пероксида водорода. При использовании 3%-го раствора наилучшие результаты Е.Э. Дьяковской с соавторами [18] получены при его концентрации 0,6 мл/л. Л.И. Литвиненко и П.А. Зенкович [25] и Л.И. Литвиненко и К.Я, Горбунова [6] также использовали 3%-й раствор в концентрации 0,6 мл/л.
По итогам наших исследований оптимальная концентрация пероксида водорода составила 0,2-0,4 мл/л. В работе И.Б. Богатовой и Ж.И. Ерофеевой оптимальная концентрация активатора определена как 0,1-0,2 мл/л [1]. Однако авторы использовали 33%-й раствор пероксида водорода, что более чем в 5 раз превышает, полученный нами, оптимум. В ранее проведенных нами экспериментах по подбору оптимальной концентрации активатора для цист, полученных из разных источников и заготовленных в разные годы, максимальный выклев наблюдался при концентрации активатора не более 0,5 мл/л (неопубликованные данные). Увеличение концентрации раствора пероксида водорода более 0,8-1,0 мл/л незначительно сказывалось на величине полного выклева, включающего все стадии выклева артемии, в том числе – «парашют» и «эмбрион», однако в этих случаях количество свободно плавающих науплиев в инкубационном растворе уменьшалось по мере увеличении концентрации активатора.
В литературных источниках приведены данные о том, что раствор пероксида водорода активирует процесс инкубации цист артемии, увеличивая выклев науплиев, однако эффективность воздействия раствора пероксида водорода на выклев артемии различна [7]. В работе Е.Э. Дьяковской отмечено, что выклев артемии из одной партии цист увеличивался по мере возрастания концентрации активатора, из чего автор сделала вывод о плохом качестве цист [18]. В нашем случае у партии низкого качества (вариант Б) добавление активатора резко увеличило выклев науплиев, который не снижался по мере роста концентрации активатора.
По мнению Г. Ван Стаппена, эффективность действия пероксида водорода и других активаторов сильно варьирует у цист различных рас [32]. Эти различия могут быть обоснованы генетическими факторами или факторами окружающей среды [10, 12, 23, 31]. Кроме того, выклев также зависит от соблюдения технологии обработки и хранения цист [29, 30]. Длительное хранение цист приводит к снижению выклева из-за негативного влияния дегидратации на развитие эмбрионов [27]. Помимо указанных факторов, Л.И. Литвиненко отмечает, что на эффективности выклева и степени воздействия активатора также сказывается сезон формирования цист. Автор утверждает, что при более низком исходном выклеве, который наблюдается, как правило, у цист летних и свежих осенних выбросов, активация перекисью более эффективна [7].
Такая разница в воздействии разных концентраций пероксида водорода может объясняться его окислительными свойствами, а также работой трегалозно-глицериновой осмотической системой цист артемии. Аэробный метаболизм эмбриона в цисте обеспечивает превращение запасного углевода трегалозы в животный крахмал гликоген (источник энергии) и глицерин, накапливающийся под внешней кутикулярной мембраной цисты. Образование и накопление глицерина ведет к дальнейшему поступлению воды в цисту под внешнюю кутикулярную мембрану, где, как следствие, непрерывно возрастает осмотическое давление. При достижении критической разницы осмотических давлений внутри цисты и в инкубационной среде происходит разрыв кутикулярной мембраны [14, 4]. После внесения пероксида водорода в инкубационный раствор, начинается процесс его разложения, катализируемый ионами металлов и некоторыми другими соединениями, в ходе чего выделяется кислород, дополнительно насыщающий среду [8]. При этом еще неразложившиеся молекулы пероксида кислорода, являясь окислителем, воздействуют на внешнюю оболочку цист, разрушая ее. Постепенно концентрация активатора становится меньше и его окислительное воздействие на цисты ослабевает. У цист низкого качества, возможно, содержание трегалозы снижается, что вызывает недостаточное количество накопленного глицерина, и, как следствие, недостаточную разницу осмотического давления. В этом случае требуется большее количество окислителя для разрушения твердой оболочки цисты, чтобы обеспечить выход науплиуса.
При внесении большего количества активатора время его воздействия на цисты увеличивается, он начинает разрушать не только внешнюю оболочку, но и воздействовать на эмбриональную кутикулу и сам зародыш. Таким образом, при избыточных концентрациях пероксида водорода, эмбрион, покрытый эмбриональной кутикулой, благодаря образовавшемуся разрыву хориона, выходит из твердой оболочки, однако выйти из внутренней эмбриональной оболочки он не в состоянии. По этой причине превышение оптимальной концентрации активатора может привести к снижению количества свободно плавающих науплиев [14].
При рассмотрении динамики выклева науплиев из цист можно отметить, что добавление активатора не ускоряет процесс выклева. Развитие зародыша происходит с одинаковой скоростью, как с добавлением активатора, так и без него. Его присутствие в инкубационном растворе увеличивает количество успешно развивающихся зародышей и свободно плавающих науплиев в итоге.
Сухие дегидратированные цисты представляют собой двояковогнутые сферы, которые через 1-2 ч. после попадания в воду гидратируются и принимают шаровидную форму (рис. 1.1). Это происходит в результате быстрого всасывания воды, которая примерно удваивает вес цисты [14, 15]. После этого, в ходе эмбрионального развития, продолжающегося 9-12 ч, формируется зародыш. Ч. Янг, изучавший эмбриональное развитие артемии [33], отметил, что спустя 3-5 ч после начала инкубации у зародыша заканчивается стадия развития зачатка конечностей, и он переходит на стадию «раннего науплиуса», а спустя 16 ч в среде появляются первые науплии на стадии «парашюта». Учитывая, что проведенные этим автором исследования выполнены при температуре 25°С, полученные им данные подтверждают наши, поскольку скорость развития эмбриона увеличивается по мере увеличения температуры. По данным Р. Уилера, формирование зародыша занимает от 16 до 20 ч, что не совпадает с полученными нами данные [35]. Учитывая, что исследования данного автора были проведены при аналогической температуре, такое расхождение в продолжительности развития может объясняться различиями в методологии, а также разным происхождением и качеством цист.
После завершения эмбрионального развития происходит разрыв твердой оболочки цисты, в результате комплекса биохимических процессов, описанных выше. Науплиус, окруженный внутренней эмбриональной оболочкой, постепенно выходит из разорвавшейся цисты (рис.1,2-1,6). При этом оболочка может остаться прикрепленной к хориону, удерживая науплиус вместе с твердой оболочкой цисты (рис. 1.7), а может оторваться от нее (рис. 1.8). После выхода из хориона науплиус, находясь внутри эмбриональной оболочки, производит активные движения антеннами, что приводит к разрыву оболочки и последующему освобождению науплиуса (рис. 1.9).
В существующих методиках рекомендуемая продолжительность инкубации составляет 24 часа. К этому моменту количество науплиев на промежуточных стадиях инкубации становится совсем незначительным, но, как нами отмечено, процесс выклева еще не окончен. При получении науплиев артемии, для дальнейшего использования в качестве корма, часто важен временной фактор, кроме того увеличение продолжительности инкубации влечет за собой дополнительные энергетические и финансовые расходы, которые не покрываются незначительным дополнительным количеством науплиев, получаемым при удлинении сроков инкубации. Исходя из полученных данных о динамике инкубационного процесса, рекомендуемая нами продолжительность инкубации составляет 18-21 ч, однако следует учесть, что она относится только к температурному режиму в 27-27,5ºС. В случае, когда инкубацию проводят при более низкой или высокой температуре, следует сделать временную поправку на увеличение или уменьшение сроков инкубации.
Исходя из полученных результатов, а также литературных данных, можно сделать вывод о том, что оптимальная концентрация активатора не универсальна и находится в пределах от 0,2 до 1,0 мл/л. Для каждой партии и, видимо, расы артемии существует свой оптимум концентрации активатора. Для получения максимального выклева необходим экспериментальный подбор концентрации раствора пероксида водорода для каждой конкретной партии. Однако в большинстве случаев оптимальная концентрация активатора находится в пределах 0,2-0,4 мл/л
Заключение
Оптимальная концентрация активатора составляет 02-0,4 мл/л. Превышение этого количества может привести к снижению количества свободно плавающих науплиев артемии, тем самым снижая эффективность инкубации. В инкубационном растворе этот активатор, воздействуя как окислитель на оболочку цисты, облегчает науплиусу выход в окружающую среду. В результате увеличивается выклев науплиев, однако ускорения процесса выклева не происходит.
1. Bogatova I.B., Erofeeva Zh.I. Inkubaciya diapauzitiruyuschih yaic Artemia salina L. bez predvaritel'nogo stimulirovaniya vykleva / I.B. Bogatova, // Gidrobiologicheskiy zhurnal. 1985. T.21. №5. S. 52-56.
2. Bogatova I.B., Shmakova Z.I. Aktivaciya diapauzitiruyuschih yaic Artemia salina L. // Gidrobiologicheskiy zhurnal. 1980. T. 16. №3. S. 108-110.
3. Voronov P.M. Aktivaciya yaic Artemia salina // Zoologicheskiy zhurnal. 1976. T. 150. vyp. 4. S. 521-525.
4. Gusev E.E. Gipergalinnaya akvakul'tura. M.: Agropromizdat, 1990. 159 S.
5. Kostomin E.A. Vliyanie faktorov sredy (solenost', temperatura, osveschennost') na inkubaciyu Artemia salina v eksperimente. // Izvestiya Sankt-Peterburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta. 2016. №42. S. 164-168.
6. Litvinenko L.I., Gorbunova K.Ya. Izuchenie vozmozhnosti vylupleniya naupliusov artemii v rape solenogo ozera pri sokraschenii srokov inkubacii cist. // APK: innovacionnye tehnologii. 2021. №3. S. 26-33. DOIhttps://doi.org/10.35524/2687-0436_2021_03_26
7. Litvinenko L.I., Litvinenko A.I., Boyko E.G. Artemiya v ozerah Zapadnoy Sibiri. Novosibirsk. «Nauka». 2009. 304 S.
8. Morozov A.R., Rodionov A.I., Kamenchuk I.N. Kinetika razlozheniya peroksida vodoroda v vode. // Uspehi v himii i himicheskoy tehnologii. 2014. T. XXVIII. № 5. S.46-49.
9. Ponomarev S.V., Gamygin E.A., Nikiforov S.I., Ponomareva E.N., Grozesku Yu.N., Bahareva A.A. Tehnologii vyraschivaniya i kormleniya ob'ektov akvakul'tury yuga Rossii. Astrahan': Nova plyus. 2002. 264 S.
10. Ahmed, S.U., Rahman, M.A., Islam, M.N., Kamal, M. (1997). Effect of decapsulation on viability and hatching performance of Artemia cysts at different salinity levels. // Bangladesh Journal of Fisheries Research. 1(2). Pp. 67-74.
11. Bengtson, D.A., Léger, P., Sorgeloos, P. (1991). Use of Artemia as a food source for aquaculture. // In R.A. Browne, P. Sorgeloos and C.N.A. Trotman (eds.), Artemia Biology, CRC Press, Boca Raton, Florida. P. 255-285. doi:https://doi.org/10.1201/9781351069892.
12. Brownee, R.A., Sallee, S.A., Grosch, D.S., Segreti, S., Purser, S.M. (1984). Partitioning genetic and environmental components of reproduction and lifespan. // Artemia Ecology. 65. P. 949-960. doi.org/10.2307/1938067
13. Bruggeman, E., Sorgeloos, P., Vanhaecke, P. (1980). Improvement in the decapsulation system of Artemia cysts. // In: The Brine Shrimp Artemia. Vol. 3. Ecology, Culturing, Use in Aquaculture. Persoone G., Sorgeloos P., Roels O., Jaspers E., (eds.). - Universa Press. Wetteren, Belgium. 456 p.
14. Clegg, G.S. (1974). Biochemical adaptations associated with the embryonic dormancy of Artemia salina / Transactions of the American Microscopical Society. No. 4. Pp. 481-490.
15. Clegg, J.S. (1964). The control of emergence and metabolism by external osmotic pressure and the role of free glycerol in developing cysts of Artemia salina // Journal of Experimental Biology. Vol. 41. N 4. Pp. 879-892. DOI:https://doi.org/10.1242/jeb.41.4.879
16. Clegg, J.S., Trotman, C.N.A. (2002). Physiological and biochemical aspects of Artemia ecology // Artemia. Basic and applied biology // eds T.J. Abotzopoulos, J.A. Beardmore, J.S. Clegg, P. Sorgeloos. Kluwer Academic Publishers. Pp. 129-170.
17. Drinkwater, L.E., Clegg, J.S. (1991). Experimental biology of cysts diapause. // in Browne R.A., Sorgeloos P. and Trotman C.N.A. (eds.), Artemia Biology, CRC Press, Boca Raton, Florida. Pp. 93-117.
18. Dyakovskaya, E., Pishchenko, E., Moryzi, I. (2021). Activation of Artemia cysts with use of different substances. // IOP Conf. Series: Earth and Environmental Science. 937. Pp. 1-7. DOIhttps://doi.org/10.1088/1755-1315/937/2/022064
19. Gajardo, G.M., Beardmore, J.A. (2012). The brine shrimp Artemia: adapted to critical life conditions. // Frontiers in Physiology. No.3. Pp. 185-193.
20. Htun, H.H., San, H.H., Swe, Z.M. (2019). Effects of Salinity on the Hatching Efficiency of Artemia Cysts Decapsulation. // International Journal of Science and Engineering Applications. V.8. No.8. Pp. 341-344. htps://www.ijsea.com/archive/volume8/issue8/IJSEA08081019.pdf
21. Islam, M.S., Kibria, M.M., Bhuyan, M.S. (2019). Production of Artemia biomass in indoor culture tank in Bangladesh. // Journal of Scientific Research. No.11 (2) Pp. 101-110. doi.org/10.3329/jsr.v11i1.36467
22. Koueta, N., Boucand-Canou, E.E., Noel, B. (2002). Effect of enriched diet an survival and growth of juvenile cuttlefish Sepia officinalis L. / N. Koueta, // Aquaculture. V. 203. P. 293-310. doi.org/10.1016/S0044-8486 (01)00640-8
23. Lavens, P., Sorgeloos, P. (1984). Controlled production of Artemia cysts under standard conditions in a recirculating culture system // Aquacultural Engineering. No. 3 P. 221-235. doi.org/10.1016/0144-8609 (84)90016-5
24. Lavens, P., Tackaert, W., Sorgeloos, P. (1986). International Study on Artemia. XLI. The influence of culture conditions and specific diapause deactivation methods on the hatchability of Artemia cysts, produced in a standard culture system // Marine Ecology Progress Series. Vol. 31. P. 197-203.
25. Litvinenko, L.I., Zenkovich, P.A. (2021). Features of Artemia cultivation in lakes with different salinity // Abstracts of the international scientific conference "Study of aquatic and terrestrial ecosystems: history and modernity". Sevastopol Pp. 623-624.
26. Marini, F. (2002). The Breeder's Net: Artemia Nauplii as a Food Source [Elektronnyy resurs] // Advanced Aquarist. V. 1(1). https://reefs.com/magazine/the-breeder-s-net-artemia-nauplii-as-a-food-source/ (Data obrascheniya 14.04.2023)
27. Mathias, P. (1937). Biologie descrustaces phyllopodes. / Actualités Scientifiques et Industrielles. V. 441. Pp. 1-107.
28. Nkambo, M., Mwanja, M., Balirwa, J.S., Bugenyi, F.W. (2019). Hatchability of Selected Commercial Artemia Strains Using Waters from Selected Saline Crater Lakes of Western Uganda / M. Nkambo, // Journal of Natural Sciences Research. Vol.9. No.18. Pp. 37-42. DOI:https://doi.org/10.7176/JNSR.
29. Rahman, M.M., Van Hoa, N., Sorgeloos, P. (2003). Handbook for Artemia pond culture in Bangladesh [Elektronnyy resurs] // Rezhim dostupa: https://digitalarchive.worldfishcenter.org/handle/20.500.12348/5374 (Data obrascheniya 14.04.2023).
30. Saygi, Y.B. Effects of hydrogen peroxide, cold storage and descapsulation on the hatching success of Artemia cysts / The Israell Journal of Aquaculture. Bamidgen. V. 55(2). Pp. 107-113. doi.org/10.46989/001c.20356
31. Sorgeloos, P., Baeza-Mesa, M., Benijits, F., Persoone, G. (1976). Current research on the brine shrimp, Artemia salina L., at the State University of Ghent, Belgium. // in: G. Persoone and E. Jaspers (eds.). Proceeding of the 10th European Symposium on Marine Biology, Unisersity Press, Wetteren, Belgium. Vol. 1. Pp .473-495.
32. Van Stappen, G., Lavens, P., Sorgeloos, P. (1998). Effects of hydrogen peroxide treatment in Artemia cysts of different geographical origin // Arch. Hydrobiol. Spec. Issues Advanc. Limnol. V. 52. Pp. 281-296.
33. Yang, C., Zhu, X., Sun, Y. (2018). Observation on the embryonic development on the resting eggs of brine shrimp Artemia using artificial decapsulation // Journal of Aquatic Science and Marine Biology. Vol. 1. Issue I. Pp. 8-13.
34. Wang, Z., Asem, A., Sum, S. (2017). Coupled effects of photoperiod, temperature and salinity on diapause induction of the parthenogenetic Artemia (Crustacea: Anostraca) from Barkol Lake, China. // North-western Journal of Zoology. V.13 (1). Pp. 12-17.
35. Wheeler, R. (1979). Hatching events in the cysts of Artemia salina. / R. Wheeler, A.l. Yudin, Jr. Clark // Aquaculture. No. 18. Pp. 59-67. doi.org/10.1016/0044-8486 (79)90102-9.
